非人灵长类动静脉分流血栓模型：如何解读血流、血栓与出血相关终点

评价动静脉分流（arteriovenous shunt，A-V shunt）血栓研究，不能只看实验结束时回收了多少血栓。在非人灵长类（non-human primate，NHP）A-V shunt模型中，血液经由体外试验段持续流动，可用于观察血流变化以及血液接触性表面的血栓形成。若同时设置与药物作用机制相匹配的止血相关评估，还可从不同角度考察抗血栓作用及其对生理性止血的影响。

三类指标的关注点各不相同。血流反映分流通路的功能状态及血栓对通畅性的影响；血栓负荷描述试验段上或其中沉积的血栓量；出血观察和止血相关检测则用于评估抗血栓干预是否伴随止血功能改变。三者互相补充，无法彼此替代，任何单一指标都不足以完整代表药物的获益与风险。

A-V shunt模型观察什么

A-V shunt血栓模型将特定材料或装置构成的试验段接入血液循环，使其暴露于流动血液中。异物表面及局部结构会影响血小板黏附与活化、凝血反应和纤维蛋白形成；这些过程受到试验材料、装置几何形态、局部血流动力学条件以及动物基础血液学状态等因素影响。

早期研究在恒河猴中使用不同试验装置，并将其置于动脉-动脉或动脉-静脉分流中，考察血栓形成。研究人员对规定暴露时间后沉积的血栓进行称重，并发现装置结构和材料会影响血栓沉积量；该研究还报告，动脉-静脉分流中的血流较动脉-动脉分流更可预测。[1] 后续相关研究使用该模型比较了不同抗血栓药物，并结合血栓称重和超微结构观察评估作用。[2] 这些研究支持A-V shunt用于研究血流条件下的装置相关血栓形成，但不能直接作为当代NHP研究的标准方案或通用参考范围。

由此看来，A-V shunt模型更接近一种在特定血液接触表面和流动条件下建立的急性血栓形成实验，无法单独复现患者自发性动脉或静脉血栓的全部病理过程。尤其需要注意，装置相关血栓指标不能直接等同于斑块破裂、静脉血栓栓塞、卒中、心肌梗死或临床移植物失功等结局。

三类相关终点及其解释边界

血流与分流通畅性

血流是观察血栓形成过程中分流回路功能变化的指标。根据研究设计，可记录基线流量和连续或定时流量，分析相对于基线的变化、随时间的变化趋势，或达到预设流量下降/中断阈值所需的时间。连续监测有助于判断血流何时开始变化、变化是否持续，这是单一终点测量无法提供的信息。

流量结果需要结合测量系统解释。探头位置、回路阻力、装置尺寸、压力条件、温度和技术性中断等因素都可能影响信号。研究方案应预先规定可接受的基线范围、信号伪差的处理办法，以及何种变化才被认定为可解释的流量下降。“闭塞时间”也只有在阈值和观察时段预先定义、且该模型在相应条件下能够稳定出现该事件时，才适合作为比较指标。

血栓量减少未必伴随血流的维持；血流保持通畅，也不代表没有形成较多血栓。例如，非闭塞性沉积可能逐渐增加而未引起明显流量变化；相反，位于关键部位的少量血栓也可能明显影响血流。血流与血栓负荷宜作为互补指标联合分析，不宜相互替代。

血栓负荷与组成

终点取材可用于量化试验段上或其中形成的血栓。称重是早期NHP分流模型研究中使用过的直接方法，但结果依赖于一致的回收、处理和称量流程。方案应明确测量湿重还是处理后重量、如何处理残留血液，以及是否根据暴露面积或暴露时间等相关装置参数进行标准化。不同组别之间应采用一致方法，并在报告中说明。

仅有血栓重量无法说明血栓由何种成分构成，也不能解释其形成机制。在有明确科学依据时，可增加影像学或显微观察，并针对血小板和纤维蛋白成分进行分析，以补充机制信息。这类分析有助于区分总体沉积量变化与血小板/纤维蛋白相对构成变化。采样位置、检测方法和评分方式应预先确定；若形态学分析尚未验证，不应将探索性观察描述为已验证的定量终点。

较完整的终点组合可将回路内的动态观察与终点样本联系起来，包括暴露期间的血流变化、终点时的血栓量，以及在适用情况下的血栓组成或形态分析。相较于单独称量终点血栓，这种组合提供的解释依据更完整。

出血与止血相关评估

评价抗血栓作用时，也需要关注干预对止血的影响。研究可根据候选药物机制和科学问题，考虑临床出血观察、血管通路或操作部位评估、方案规定的出血相关指标，以及相应的实验室或药效学检测。具体检测组合应针对研究对象确定，不宜不加区分地照搬其他物种或其他药理类别的方案。

如使用出血时间，其结果会受到测量方法和操作过程影响，不宜直接视为临床出血风险的估计。常规凝血检测、血小板计数或血小板功能检测也各自只反映止血过程的一部分，未必对所有作用机制都敏感。将出血观察与药物暴露和机制相关药效数据结合，例如与相应的凝血通路或血小板功能检测对照，有助于解释结果，但任何单项实验室指标都无法独立代表完整的安全性结论。

NHP出血相关终点还需要标准化且经过伦理审查的观察与处置流程。研究方案应说明观察和分级方法、观察时段、随访或干预标准，以及如何区分操作相关出血与可能的药物相关信号。在小样本研究中，即使观察到血栓减少而未记录到出血，也不能据此宣称“无出血风险”。

围绕药理学问题设计终点组合

终点选择应服务于预期的研究决策。对于抗血小板候选药物，可重点考虑血小板沉积或功能、血流变化以及相关止血评估；对于抗凝药物，凝血通路药效学和药物暴露可能是解释血栓变化的重要依据；对于表面改性装置，则可能需要更关注材料相关的沉积特征及表面表征。无论哪种研究，终点都应与作用机制及模型适用范围相匹配。

一项设计合理的A-V shunt研究，通常需要协调以下几类信息：

• 功能反应： 血流变化，以及预先设定的通畅性或闭塞指标。
• 血栓反应： 沉积量；在科学问题需要时增加组成或形态评估。
• 药理学信息： 具有可解释时间关系的药物暴露和机制相关药效学测量。
• 止血背景： 临床出血观察，以及针对候选药物选择的实验室或功能指标。

统计分析计划应明确主要终点，并区分支持性终点与探索性指标。随机分组、条件允许时的盲法评估、适当对照、样本量依据，以及对技术性失败的预先处理规则，都有助于减少可避免的解释不确定性。如采用重复给药或动物内比较，还需在设计中考虑残留效应、洗脱期和终点自身的生物学变异。

影响研究结果的变异来源

A-V shunt血栓研究的结果与具体实验构型密切相关。装置材料和几何形态、暴露表面积、回路尺寸、流动条件、暴露时间及围手术期管理都可能影响血栓形成。动物的血小板数量和功能、血细胞比容、凝血状态、物种及个体差异、合并用药等生物学因素也会改变观察结果。

这些因素本身就是研究变量。若它们在组间或研究阶段之间不一致，观察到的药物效应也可能随之改变。因此，基线血液学检查、装置制备和处理流程一致性、流量设备校准、操作标准化及完整记录，都是终点可信度的重要组成部分。方案还应预先规定如何记录和分析意外断流、装置故障或血栓形成不足等情况。

NHP研究可用于在灵长类动物中综合观察药物暴露、药理作用和止血反应，但仍需对具体模型进行适用性确认。早期恒河猴研究表明，A-V shunt可用于研究血栓生成及抗血栓药物作用；这些结果不足以支持将研究发现不加验证地迁移至其他物种、装置构型、药物类别或当代试验条件。[1,2]

浦灵生物（Prisys Biotechnologies Co., Ltd.，简称 Prisys Biotech）的NHP模型目录将A-V shunt列于心血管方向模型。具体研究中采用的动物物种、分流系统构型以及血流、血栓和止血相关终点，应根据研究目的和项目方案确认。模型名称本身不代表某一终点已完成跨研究验证，结果也不能直接外推至临床。

转化解读：综合判断获益与风险，而非依赖单一指标

结果解读不宜止于“候选药物降低了血栓形成”。还应进一步判断：变化体现在血流、血栓负荷，还是两者均有变化；这些变化是否与药物暴露及预期药效机制一致；相同暴露范围内的止血相关数据又显示了什么。不同终点之间的不一致未必说明研究失败，也可能来自指标敏感性、测量时点、血栓位置或药理机制的差异。

当模型构型和终点与研究决策相匹配时，NHP A-V shunt血栓模型可为抗血栓药理研究提供临床前证据。其价值在于同一实验背景下观察血流、装置相关血栓和系统性药理信息。该模型本身也具有急性和依赖具体构型的特点；仅凭该模型不能确立临床疗效、临床出血风险或特定患者人群中的治疗获益。

对转化研究团队而言，重点是先明确研究问题，再选择能够联合解释的血流指标、血栓指标和止血评估。终点之间能否形成清晰、可解释的证据链，比终点数量更能决定研究价值。

常见问题

NHP A-V shunt血栓模型主要测量什么？

该模型在NHP体内，使血液流经特定的血液接触性试验段，以评估血流条件下的血栓形成。根据研究方案，相关终点可包括血流变化、回收血栓负荷、血栓组成、药物暴露、药效学作用及止血相关表现。

为什么要同时测量血流和血栓量？

血流反映实验过程中的通路功能状态；血栓量则反映终点时沉积的血栓物质。两者相关但不可互换：血栓可在未闭塞时持续沉积，而位于关键部位的少量血栓也可能对血流产生较大影响。

血栓负荷降低是否意味着出血风险也降低？

不能这样推断。抗血栓作用和出血/止血表现属于相关但不同的药理学维度，需要分别评估。研究应采用与作用机制相适应的止血评估，不能仅凭血栓负荷下降推断临床出血风险不存在。

A-V shunt研究结果能否预测临床血栓结局？

该研究可为特定装置与血流构型下的临床前抗血栓活性提供证据，但不能单独预测临床结局，也不能复现自发性动脉或静脉血栓形成的所有机制。

参考文献

1. Mason RG, Wolf RH, Zucker WH, Shinoda BA. A nonhuman primate vascular shunt model for thrombus generation. Laboratory Investigation. 1976;34(6):558–564. PubMed PMID: 819713
2. Mason RG, Wolf RH, Zucker WH, Shinoda BA, Mohammad SF. Effects of antithrombotic agents evaluated in a nonhuman primate vascular shunt model. American Journal of Pathology. 1976. PubMed PMID: 820202

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